1908年11月14日，光绪帝驾崩于瀛台，年仅38岁。光绪4岁登基，已经当了34年的傀儡皇帝，而此时，连傀儡也当不成了，这就是他悲催的一生。光绪帝死后不到24小时，也就是1908年11月15日，慈禧也死了，如此之巧合，让人们不得不怀疑光绪是慈禧临终下令谋害的。慈禧知道自己不行了，就顺便把光绪帝也弄死，以防光绪掌权后清算旧账，把她拖出来鞭尸雪恨，这似乎很合理。

关于光绪的死因，被猜测了整整一百年，直到2008年11月2日，经过对光绪皇帝残留的一缕头发的鉴定，国家清史编纂委员会正式宣布光绪是死于急性砒霜中毒，也就是说光绪确实是被毒死的。这个困扰了世人长达百年的光绪死因之谜就此破解。那么，这个下毒的人到底是谁呢？

慈禧

慈禧下毒说自然是主流。正如上文所述，慈禧有杀害光绪的动机和能力，慈禧死了，光绪肯定是要继续当皇帝的，慈禧担心光绪秋后算账，让她死后不得安宁，所以才会在病危之时对光绪下毒手。这种说法很合逻辑，也很有可能，但并非唯一可能。

袁世凯

光绪的侄子、末代皇帝溥仪认为杀害光绪帝的凶手是袁世凯。他在《我的前半生》一书中指出，袁世凯知道光绪帝对他深恶痛绝（袁世凯出卖光绪及维新派，导致戊戌变法失败），害怕慈禧死后光绪复位掌权会对他下手，所以就设计谋害了光绪帝。但这种说法只是溥仪的猜测，并无证据。

要做到神不知鬼不觉地毒杀光绪，至少需要具备三个条件：一是能自由进入光绪皇帝囚禁的瀛台；二是和光绪皇帝很熟悉，或者光绪对他颇为信任；三是受到慈禧太后的宠信。

李莲英

慈禧的御前女官德龄公主在《瀛台泣血记》中提出，下手毒害光绪帝的人是李莲英。启功先生也说，“我曾祖父看到一个太监端着一个盖碗从乐寿堂里出来，谨慎起见，就问太监端着的是什么，回答是‘老佛爷赏给万岁爷的塌喇（酸奶）’。”试想，当时李莲英也在现场，以他的能力，能不知道这可能是毒药？因此，除了慈禧太后外，李莲英就成为了另一个嫌疑人。但此种说法只是一面之词，并无其他史料佐证。

总之，有动机杀光绪帝的人很多，包括所有欺负过光绪、害怕光绪报复的皇亲大臣，甚至宫女太监，但是慈禧的嫌疑仍然最大。